Метод экзогенных РНК

Сам по себе метод экзогенных РНК не нов, он успешно используется в экспериментальной иммунологии, онкологии, эмбриологии, эндокринологии и т.д. Однако в исследованиях, посвященных физической деятельности, этот метод ранее не использовался. Против метода экзогенных РНК выдвигались возражения, сводившиеся в основном к отрицанию специфичности вызываемых эффектов или даже самой возможности проникновения в клетку молекул РНК в нераспавшемся состоянии, особенно in vivo.

Тем не менее очень многими авторами показаны как проникновение высокополимерных РНК в клетки-мишени, так и выраженная специфичность их действия. Нет необходимости приводить все известные нам доказательства, поэтому мы сошлемся лишь на работы обзорного характера, в которых представлены и обсуждаются подобные доказательства, а также противоречащие им данные [Ляшенко В. А., 1972; Белоус А. М. и др., 1979; Villie D. et al., 1970; Fritze D. et al., 1976].

Метод экзогенных РНК использовался нами для оценки роли глюконеогенеза в механизме повышения физической работоспособности глюкокортикоидными гормонами, в частности гидрокортизоном. С помощью введения животным-реципиентам РНК из печени и коры почек животных, которым инъецировался гидрокортизон, мы рассчитывали воспроизвести у реципиентов только эффекты, опосредованные через активацию протеин-синтеза в этих органах, т. е. выделить их из многообразного действия гидрокортизона в организме донора и воспроизвести в чистом виде у реципиента.

Активирующее влияние глюкокортикоидов на протеинсинтез в печени и почках, заключающееся в усилении синтеза всех ферментов гюконеогенеза, осуществляется за счет увеличения числа молекул соответствующих иРНК [Виру А. А., 1981]. Исходя из этого, имелись все основания полагать, что с помощью экзогенных РНК (эРНК) окажется возможным воспроизвести в печени и почках животных-реципиентов именно активирующее влияние глюкокортикоидов на глюконеогенез.

Выделение РНК из органов производилось с помощью одного из вариантов фенольно-термического метода [Тодоров И. Н. и др., 1967]. В большинстве опытов использовались тотальные клеточные РНК, поэтому первичная фенольно-термическая обработка гомогената ткани производилась при температуре 65°С, что позволяет сразу выделить все фракции РНК, в том числе наиболее важную фракцию — фракцию иРНК. При выделении РНК из печени гликоген отделялся высокоскоростным центрифугированием (20 000 об/мин).

После заключительного осаждения спиртом РНК растворялись в воде и спектрофотометрически при длине волны 265 нм определялась их концентрация в полученном растворе. Доза РНК, выделенных из печени и почек, при введении животным-реципиентам составляла в большинстве опытов 0,5 мг/кг. Вообще эРНК по результатам наших исследований вызывают свойственные им эффекты в широком диапазоне доз, начиная с 0,005 мг/кг.


«Фармакологическая коррекция утомления»,
Ю.Г.Бобков, В.М.Виноградов

Читайте далее: